Количественное исследование бактерий в моче по Броду.
Техника исследования: мочу для исследования у женщин выводят стеклянным катетером, а у мужчин используют мочу при спонтанном мочеиспускании, после предварительного основательного вычищения ладьевидной ямки (расширение уретры в области головки полового члена) 50 %-ным спиртом. В нескольких чашках Петри с кровяным агаром производят посев из неразведенной и разведенной в различной степени мочи. По числу колоний определяют количество бактерий в 1 мл мочи (1 колония = 1 бактерия).
Принцип: активно дышащие бактерии восстанавливают бесцветный раствор 2,3,5-трифенилтетразолового хлорида до красного нерастворимого трифенил формазана.
Техника исследования: к 2 мл хорошо взболтанной мочи прибавляют 0,5 мл рабочего раствора (№ 2). Пробирка инкубируется в течение 5 ч при температуре 37 °C. При положительном результате пробы образуется красный осадок трифенил формазана (при наличии более 100 000 бактерий в 1 мл). При отсутствии красного осадка – проба отрицательна.
Проба является ориентировочной, но достаточной для клинических целей.
Бактериологический метод применяется в тех случаях, когда бактериоскопическое исследование не дало положительных результатов.
К моче добавляют двойной объем 6 %-ного раствора серной кислоты, затем в течение 10 мин. энергично встряхивают и центрифугируют в пробирке, жидкость убирают, а осадок нейтрализуют путем добавления нескольких капель 3 %-ного раствора едкого натрия и проводят посев. Данный метод основан на способности микобактерий быть устойчивыми к воздействию кислот и щелочей.
В настоящее время найдены ускоренные бактериологические методы роста микобактерий на препаратах-мазках (по Прайсу) или выращивания на кровяной среде. При исследовании мочи на туберкулезные микобактерии следует помнить о том, что их с мочой выделяется относительно мало, и несколько больше МБТ обычно содержится в утренней моче. Поэтому для исследования собирают утреннюю порцию мочи. Еще одним методом обнаружения микобактерий является микроскопия осадка мочи, окрашенного по методу Циля – Нельсена (бактериоскопический метод). Мочу центрифугируют и готовят мазок из ее осадка. После подсыхания мазок исследуют при помощи иммерсионной микроскопии и просматривают 100 полей зрения. Микобактерии обнаруживаются как ярко-красные, тонкие, расположенные в одиночку или группами, в основном находящиеся вне клеток палочки.
Наиболее результативным бактериоскопическим методом выявления МБТ является люминесцентная микроскопия, которая позволяет повысить результативность исследования. При люминесцентной микроскопии микобактерии светятся золотисто-оранжевым светом на черном фоне (картина «звездного неба»). В особо трудных случаях диагностики нефротуберкулеза может быть применена биологическая проба (прививка мочи морской свинке). Свинка при заражении погибает от милиарного туберкулеза, или ее выводят из опыта через 1,5–2 месяца и производят гистологическое исследование внутренних органов.
К преимуществам посева мочи на питательные среды перед биологической пробой относится возможность определения чувствительности и устойчивости микобактерий туберкулеза к лекарственным препаратам. Поэтому исследование мочи на МБТ должно проводиться многократно от 5– до 10-кратного посева мочи.
Глава 10. Исследование кала