Метод заключается в многократном увеличении (амплификации) количества ДНК выявляемого микроорганизма. Разработка вариантов ПЦР для диагностики сифилиса обусловлена недостаточностью стандартных тестов при раннем серонегативном, врожденном сифилисе и нейросифилисе. ПЦР является превосходным методом для диагностики сифилиса при небольшом количестве трепонем в исследуемом материале. Большим достоинством ПЦР является возможность автоматизации реакции путем заданного циклического температурного режима для определяемой за счет меченных праймеров цветной реакции. Остается невыясненным вопрос – отражает ли наличие трепонемной ДНК присутствие жизнеспособных трепо-нем или это могут быть остатки погибших микроорганизмов, содержащие способную к амплификации ДНК.
Применение ПЦР может иметь большое значение при диагностике врожденного сифилиса (пассивный трансплацентарный перенос антител не влияет на результаты теста), нейросифилиса, первичного серонегативного сифилиса (в настоящее время единственным критерием является прямое микроскопическое обнаружение трепонем), а также у больных, у которых диагностика сифилиса с помощью обычных серологических реакций затруднена из-за ин-фицирования ВИЧ (Дмитриев Г.А., Брагина Е.Е.).
Исследование спинномозговой жидкости.
Особое внимание уделяется исследованию спинномозговой жидкости (ликвора) для определения пораженности сифилисом нервной системы, как критерий качества лечения у лиц с патологическими изменениями в ликворе до начала лечения и как один из критериев излеченности больных.
Спинномозговую жидкость получают при люмбальной пункции. Место прокола соответствует точке пересечения двух линий: вертикальной (идет вдоль остистых отростков) и горизонтальной (линия Якоби). Горизонтальная линия должна соединять гребни подвздошных костей и проходить между остистыми отростками позвонков.
В пробирку собирают 7-8 мл (но не более 10 мл) спинномозговой жидкости. Это количество распределяют в две пробирки, одну из которых направляют в клиническую лабораторию, а другую – в серологическую лабораторию.
В клинической лаборатории исследуют цитоз, содержание белка, глобулиновые реакции Панди и Нонне-Апельта. Минимальные патологические изменения в спинномозговой жидкости следующие: содержание белка, начиная с 0,4%, цитоз – 8 клеток в 1 мкл, глобулиновые реакции (реакция Нонне – Апельта++, реакция Пан-ди+++; реакция Ланге – больше двух двоек в цифровом значении, положительная реакция Вассермана). Показатели выше указанных, даже будучи изолированными, свидетельствуют о выраженных патологических изменениях в спинномозговой жидкости. Патологической считается также такая спинномозговая жидкость в которой несколько показателей изменены соответственно данным минимальной патологии, а реакция Вассермана положительна. Концентрация белка в спинномозговой жидкости свыше 400 мг/л и число клеток в ней более 5000 на 1 л свидетельствуют о воспалительном процессе в ЦНС. Для обозначения позитивности глобулиновых реакций и РВ применяется система четырех плюсов; резко положительный результат (4+), положительный – 3+, слабоположительный – 2+ и сомнительный – 1+.
В серологической лаборатории ставятся реакция Вассермана, реакция Ланге с коллоидным золотом, РИТ, РИФ, РИФЦ (реакция иммунофлуюоресценции с цельным ликвором), а также реакция ТРНА, либо реакция FTAABS, либо реакция IgM TPHA. Отрицательная реакция ТРНА, либо FTAABS исключает нейросифилис. Положительная реакция IgMTPHA со спинномозговой жидкостью и индекс ТРНА свыше 10 подтверждают наличие сифилитического процесса в ЦНС. Использование РИФ также целесообразно при лик-вородиагностике сифилиса. Особенно высокочувствителен и специфичен тест с цельным ликвором (РИФц). РИБТ со спинномозговой жидкостью по оценке результатов аналогична таковой при исследовании сыворотки крови. Применение РИФ РИБТ и IgM ТРНА расширяет возможности выявления сифилитического поражения нервной системы.
При ранних формах нейросифилиса более выражены количественные отклонения цитоза, концентрации белка, сочетающиеся с минимальной патологией коллоидной реакции. Тяжелые паренхиматозные сифилитические поражения головного и спинного мозга сопровождаются выраженными изменениями коллоидных реакций до пяти или шести «шестерок» в реакции Ланге. Реакция Вассермана в спинномозговой жидкости иногда может быть ложноотрицательной или ложноположительный. Положительные неспецифические данные реакции Вассермана в спинномозговой жидкости могут наблюдаться при опухолях мозга, эхинококкозе, цистицеркозе, рассеянном склерозе и паркинсонизме.