Хищные грибы - друзья человека

При исследовании почвы на содержание хищных грибов культуры закладывают иным способом. Небольшое количество почвы, подлежащей исследованию, рассыпают по дну пустой стерильной чашки Петри; агар, предварительно охлажденный примерно до температуры его затвердевания, наливают сверху почвы, после чего агар и почву осторожно перемешивают. Агар, применяемый в этих случаях, должен содержать очень мало питательных веществ. При использовании агара, приготовленного по вышеприведенному рецепту на кукурузной муке, кукурузный отвар следует до добавления агара разбавить по крайней мере 3 частями воды. Вместо кукурузного отвара лучше даже использовать слабый настой экскрементов кролика.

При выделении хищных грибов из почвы часто оказывается, что в культурах или мало нематод или совсем их нет. Так как способность хищных грибов конкурировать с плесенями обусловливается их плотоядным образом жизни, то отсутствие добычи может помешать их появлению в культуре. Поэтому почвенные культуры следует обеспечить нематодами. Нематоду Ditylenchus dipsaci можно легко получить, намочив в воде немного сухого растительного материала, содержащего этих нематод; вылупляющихся личинок можно выделить из частиц материала при помощи сепаратора Бэрмана. Этот прибор представляет собой обычную воронку для фильтрования с куском резиновой трубки и зажимом. Материал, содержащий нематод, завертывают в кисею и помещают в воронку, которую заполняют водой. Прибор оставляют в таком положении на 24 часа; за это время нематоды проходят через материю и спускаются в нижний конец резиновой трубки, откуда их можно извлечь, ослабив зажим. Другой способ получения нематод для стимулирования активности грибов состоит в содержании культур нематод на агаре, приготовленном на экскрементах кролика; в основном этот способ хорош, но иногда может подвести исследователя в самый ответственный момент.

Первичные культуры, полученные вышеописанными методами, содержат при комнатной температуре и периодически исследуют на содержание хищных грибов. В термостат их ставить не следует, так как относительно низкая температура более благоприятна для грибов. Свободноживущие хищные грибы обычно появляются довольно быстро, но иногда, особенно при недостатке нематод, они могут встречаться только небольшими группами. Иногда их можно распознать по спорам, которые часто бывают видны на концах воздушных конидиеносцев, вырастающих из материала, использованного в качестве инокулума; поэтому каждый раз, как производится осмотр культуры, следует тщательно осмотреть при слабом увеличении микроскопа и инокулум.

Свободноживущие хищные грибы могут появиться через несколько дней после постановки культуры, но нередко появление их задерживается; поэтому выбрасывать культуры можно не раньше, чем после трехмесячного периода наблюдений.

Гораздо труднее обнаружить внутренних паразитов нематод, например Harposporium. Для этого нужно отыскивать мертвых нематод с выходящими из них гифами; при этом часто полезно бывает перевернуть чашку Петри и исследовать культуру через ее стеклянное дно, так как нематоды, пораженные Harposporium и подобными ему грибами, часто, погибая, опускаются на дно агара и поэтому остаются незамеченными при наблюдении сверху. Для отметки местоположения обнаруженного экземпляра, который может понадобиться позднее для более детального исследования, рекомендуется при слабом увеличении микроскопа навести кончик пера автоматической ручки на то место стеклянного дна чашки Петри, под которым непосредственно лежит зараженная нематода; при слабом нажатии на кончик пера на стекле остается небольшое чернильное пятнышко, которое быстро высыхает и, подобно бую на воде, отмечает местонахождение нематоды.

Если хищные грибы, улавливающие нематод, обнаружены, то их следует по возможности выделить в чистую культуру. При наличии спор этих грибов выделение произвести легко, сняв споры с вершины воздушного конидиеносца при помощи стерильной иглы с очень небольшой частицей стерильного агара на конце и перенеся их в чашку с кукурузным агаром. Лучше всего эту операцию производить под бинокулярным микроскопом. Выбрав конидиеносец с удобным расположением спор, нужно поднять объектив микроскопа примерно на 1 см, навести фокус на конец иглы и, сохраняя ее в поле зрения, опускать объектив до тех пор, пока цель не появится в поле зрения. Подобный способ дает возможность осторожно подвести иглу к споре и избежать опасности случайного прикосновения к поверхности агара. Любая попытка подвести иглу к спорам, сохраняя последние в фокусе, неизбежно оканчивается неудачей.

Грибы, улавливающие нематод, обычно хорошо растут в чистой культуре на агаре, сваренном на кукурузном отваре, но они, как правило, не образуют ловушек до тех пор, пока не появятся нематоды. Чтобы вызвать образование ловушек, лучше внести небольшое количество гриба в культуру нематод, чем добавлять нематод в чистую культуру гриба.