РИФ-реакция иммунофлюоресценции была предложена в 1942 г. Coons и соавторами. Она основана на люминесценции антител, меченных различными флюорохромами, при этом антитела вступают в контакт с антигенами на поверхности объектов исследования. Используется непрямая реакция иммунофлюоресценции, состоящая из двух этапов:
1) контакт антигена с нефлюоресцирующей сывороткой;
2) обработка объекта исследования люминесцирующей сывороткой.
После установления принадлежности крови человеку определяют ее группу.
Определение группы крови
При расследовании таких тяжких преступлений, как убийство, изнасилование, совершенных при отсутствии свидетелей, выяснение возможной принадлежности крови потерпевшему, подозреваемому приобретает особо важное значение.
Определять групповую принадлежность можно в следах крови на предметах, в тканях расчлененных частей трупов, в жидкой крови, изъятой у потерпевших или подозреваемых в качестве образцов. При исследовании трупа с повреждениями, сопровождающимися наружным кровотечением, определение группы крови, изъятой из трупа, обязательно. В дальнейшем могут быть обнаружены следы крови на предметах, у лиц, подозреваемых в совершении преступления, на транспортных средствах, месте происшествия. Групповая принадлежность этих следов должна сопоставляться с групповой принадлежностью образцов крови погибшего.
Определение групповой принадлежности крови основано на обнаружении особых веществ, имеющихся на поверхности эритроцитов (антигены) и в сыворотке крови (агглютинины). В сыворотке крови здорового человека, как правило, не встречаются агглютинины, вступающие в реакцию с антигенами, находящимися в эритроцитах данного лица. На этом основано разделение всех людей на группы. Групповые признаки развиваются еще в утробном периоде жизни. Впоследствии данные признаки качественно не меняются. В сухой крови и ее следах агглютинины могут сохраняться несколько лет. Антигены сохраняются значительно дольше.
Кроме эритроцитов, такие же антигены содержатся в органах и тканях человека, его выделениях, что дает возможность определять их групповую принадлежность. Каждый человек обладает характерным для него индивидуальным набором антигенов и сывороточных белков.
Групповая принадлежность следов крови практически определяется в пределах эритроцитарной изосерологической системы АВО, при необходимости по системам Р, Льюис, MNSs, Резус, глобулиновой системы сыворотки. В жидкой крови возможно более широкое определение. Имеется возможность выявить или исключить в пятнах жидкой крови значительно большее количество системы как эритроцитов, так и сыворотки, системы ферментов и др.
По системе АВО кровь людей разделяется на четыре группы: O(I), A(II), В(Ш) и AB(IV). При определении групповой принадлежности образцов жидкой крови исследуются отдельно эритроциты и сыворотка. При исследовании пятен ставится контрольная реакция материалом предмета – контроль предмета-носителя.
Трудности определения групповой принадлежности крови в пятнах связаны главным образом с влиянием самого материала, предмета, на котором обнаружены следы крови, а также с небольшим количеством крови в пятнах, первоначальной силой антигенов и агглютининов.
Определение групповой принадлежности крови позволяет исключить ее принадлежность определенному лицу (потерпевшему или подозреваемому) или указать, что такое исключение нельзя сделать.
Групповая принадлежность жидкой крови определяется в связи с разрешением вопросов о спорном отцовстве, замене детей, краже ребенка и, как исключение, о спорном материнстве. Исследование основано на закономерностях передачи потомкам по наследству групповых признаков.
Дифференцирование крови взрослого человека и плода
Кровь плода, новорожденного ребенка и ребенка в возрасте примерно до 1 года отличается от крови человека старше данного возраста. Отличия заключаются в строении некоторых определенных белков, в частности R-фетопротеина. Дифференцировку белков, имеющихся в крови взрослого человека, от соответствующих белков младенца производят с использованием методов электрофореза. Также возможно выявить различия в активности некоторых ферментов с применением биохимических методов. Вышеуказанные методики широко не используются в повседневной практике ввиду сложности их выполнения, а также необходимости применения дорогостоящих реактивов и оборудования.
Кроме того, гемоглобин взрослых менее устойчив к щелочной денатурации, чем гемоглобин плода.
В 1958 г. немецкими исследователями для клинических целей был предложен цитологический метод выявления фетального гемоглобина.
В 1984 г. Н. В. Белихиной была предложена методика выявления FeHb для судебно-медицинского исследования вещественных доказательств. Принципиальную основу метода составляет то, что FeHb более устойчив к воздействию HCl (соляной кислоты) и пепсина по сравнению с НЬ взрослого человека.
Возможности регионарного происхождения крови