По условиям заключенного в августе 1529 г. в Камбре мира Империя признавала права Франции на Бургундию, но Франция отказывалась от своих притязаний на Италию, Фландрию и Артуа. Она обязывалась также оказать императору помощь в борьбе с турками. Французы вынуждены были подписать Камбрейский мир, однако Франциск I отнюдь не собирался выполнять его условия. И все же этот мир стал началом установления диктата Габсбургов в Италии. Неаполитанское королевство и герцогство Миланское были объявлены владениями испанской короны. Габсбурги стали фактическими хозяевами Италии: папа, Савойя, Монферрат, Мантуя и Феррара признали себя их вассалами. Франция сохранила за собой только Пьемонт. Но заключение мира в Барселоне и Камбре не могло полностью удовлетворить Карла V. Назначив на ноябрь 1530 г. коронацию в Болонье (после 1527 г. он опасался появляться в Риме), император стремился к тому, чтобы на этой церемонии присутствовали короли Англии и Франции, что, по мнению Карла, должно было продемонстрировать всему миру признание его первенства среди монархов Европы. Но короли, разгадав замысел Карла V, отказались прибыть на коронацию.
В своей кипучей политической деятельности Карл V не знал покоя. Еще не успели засохнуть чернила на перьях, которыми были подписаны договоры в Барселоне и Камбре, как над Империей нависла турецкая угроза.
18 августа 1529 г. эрцгерцог Австрийский Фердинанд отправил из Линца к императору своего агента с сообщением о приближении турок к Вене. Фердинанд еще за три месяца был предупрежден о походе турецкой армии и не только собрал свои австрийские войска, но и обратился за помощью к императору и немецким князьям. Благодаря вовремя подоспевшим подкреплениям и правильно организованной обороне австрийцы благополучно выдержали осаду: в октябре турки, не имевшие возможности продолжать осадные действия в преддверии зимы, отошли на зимние квартиры. Но турецкая угроза еще не миновала.
Турецкая империя достигла вершины своего могущества при Сулеймане I Кануни (Законодателе), известном в европейской традиции как Сулейман Великолепный, и это неизбежно столкнуло ее в военном противостоянии с державой Карла V.
В начале 1520-х гг. турки последовательно захватили Белград, затем и остров Родос, а в конце августа 1526 г. нанесли сокрушительное поражение венгерской королевской армии, причем сам король Венгрии Лайош II, родственник Габсбургов, погиб.
Карл V, в сущности, ставил в своей политике турок и немецких князей — сторонников Реформации на одну доску. И в этом его позиция была близка позиции папской курии. Римские папы, начиная еще со второй половины XV в., многократно обращались к западноевропейским монархам с предложениями помириться между собой и присоединиться к «крестовому походу» против турок под эгидой папства. Габсбурги тоже пытались возглавить борьбу против турок, надеясь сделать ее средством подчинения европейских монархов своей универсалистской политике. Нередко папство оказывало императору поддержку в этом стремлении. Так, прогабсбургский папа Адриан VI в 1522 г. призывал Франциска I примириться с его противниками — Карлом V и Генрихом VIII. Порой император подстегивал папство к активным действиям. Например, в октябре 1525 г. Карл V указывал своему послу в Риме герцогу де Сессе, что крестовый поход против турок имеет целью прежде всего защиту испанских интересов в Африке, и поэтому следует уговорить папу Климента VII дать согласие на его проведение.
В письмах к Генриху VIII император неоднократно подчеркивал, что готов обратить оружие против турок, если к нему присоединятся английский и французский короли. Обвиняя французского короля в вероотступничестве и контактах с Османской империей, Карл V сам вовсе не гнушался связей с персидскими шахами-мусульманами из династии Сефевидов — Тахмаспом и Измаилом, боровшимися с турками за преобладание на Ближнем Востоке. В августе 1525 г. в ответ на предложение шаха Измаила совместно выступить против турок Карл дал согласие, а затем, в 1529 г., и сам послал подобное же предложение в Исфаган. В 40-х гг., чтобы развязать себе руки для подавления оппозиционных немецких князей-реформаторов и для ведения войны против Франции, император одобрил открытие переговоров между турками и эрцгерцогом Фердинандом, считая, что эти переговоры могут принести много неудобств французам. И в мае 1545 г. в Стамбул для ведения мирных переговоров был отправлен императорский посол Герхард Вельтвик. Мир был заключен, поскольку обе стороны нуждались в нем: турки вели длительную войну с персами, кроме того, начались серьезные волнения среди покоренных народов.