Родился Гнат Хоткевич в Харькове 19 (31) декабря 1877 года. Правда, впоследствии в его документах можно было найти и другой год рождения — 1876-й. Объяснял это Хоткевич тем, что при поступлении в институт специально приписал себе один год. В самом раннем возрасте Гнат уже увлекался украинской культурой, особенно — музыкой и театром. В 17 лет он выучился игре на бандуре и стал настоящим виртуозом. Впервые старинный инструмент Хоткевич услышал в Дергачах, где на нем играл слепой кобзарь Павло. В 1895 году талантливый скрипач и бандурист Арсентий Остапенко (Мова) изготовил бандуру для Гната, и тот начал концертную деятельность под псевдонимом Гнат Галайда.
Однако окончил Хоткевич не музыкальную школу, а реальное училище и поступил, как уже было сказано, в Технологический институт. Студентом Хоткевич активно включился в культурно-просветительскую, а затем и в политическую жизнь региона. Он руководил студенческим хором, вместе с А. Матюшенко, будущим организатором восстания на броненосце «Потемкин», Гнат Мартынович устраивал представления, ездил по местам казацкой славы. Встав на путь так называемых «малых дел», Хоткевич на самом деле совершал дело большое, он стал одним из главных проводников украинского культурного возрождения, которое органично совпало по времени с нарастанием революционной ситуации в стране, а затем и с самой революцией, серьезными изменениями в Российской империи. От отдельных представлений и гастролей Гнат Хоткевич перешел к организации более или менее постоянных театров для беднейших слоев населения. Он основал драматический кружок в Дергачах, затем крестьянский театр в Печенегах, наконец в 1901 году Рабочий театр в самом Харькове. Все эти начинания были едва ли не первыми в своем роде.
В 1899 году Хоткевич вошел в контакты с украинскими социал-демократами. В том году в Харькове состоялись студенческие выступления, в которых принял участие и Гнат Мартынович. За это он был временно исключен из института, но восстановился и в 1900 году все-таки окончил ХТИ. В период вынужденного «простоя» Хоткевич успел побывать в Киеве, где добился встречи с композитором Лысенко. Тому очень понравилась игра харьковчанина на бандуре, Николай Витальевич предложил Хоткевичу место бандуриста в оркестре на 60 рублей в месяц.
Вернувшись в Харьков, Хоткевич некоторое время занимался книгоиздательским делом, организовал выпуск популярных книжек для народа «Всi гуртом». Сам был и редактором, и корректором, и продавцом. Важной вехой в биографии Хоткевича стал 12-й Археологический съезд, проводившийся в Харькове в 1902 году. Съезд рассматривал не только вопросы, которые мы сейчас стойко ассоциируем с такой наукой, как археология. В то время речь шла скорее об «изучении древностей» в самом широком смысле слова «древность». Сюда, безусловно, относили и памятники народного творчества, в том числе и фольклорные, песенные, эпос… Таким образом, археологические съезды в Украине объективно способствовали повышению интереса к самобытной украинской истории и культуре, работали в противовес постоянным попыткам российских властей объявить малороссийскую культуру и язык лишь частным случаем русской культуры. На упомянутом съезде в Харькове Хоткевич выступил с организованным им ансамблем кобзарей-лирников. Музыкантов, хранивших традиции, казалось бы, забытой культуры, Гнат Мартынович разыскивал по всей Украине, да и сам буквально воскресил инструментальную украинскую музыку, пользуясь книжными источниками. Особенно большой интерес вызывала у Хоткевича бандура — истинно украинский музыкальный инструмент, который подвижник украинской музыки не только пропагандировал, но и реконструировал. На том же съезде Гнат Мартынович предложил создать постоянный ансамбль бандуристов. Идея эта была реализована лишь в 1918 году в Киеве, где появилась капелла под управлением Василия Емца. Вторая украинская капелла бандуристов появилась в 1925 году в Полтаве, ею руководил Владимир Кабачко. В 1930-е годы большинство членов капеллы были репрессированы, оказались в лагерях, после войны эмигрировали в США, где возникла новая капелла, с успехом выступающая и до сих пор, хранящая и приумножающая традиции украинского музыкального искусства. До сих пор бандуристы исполняют произведения Хоткевича.