Интерес Н.Б. Юсупова к искусству явился результатом полученного им воспитания. Вероятно, картины работавшего в России при императрице Елизавете Петровне итальянца Пьетро Антонио Ротари попали в семью еще при Б.Г. Юсупове, отце Николая Борисовича. Дальнейший интерес князя к искусству проявился во время учебы в Лейденском университете в Голландии, затем — во время его путешествия по Европе. Результатом этого путешествия явились не только новые знания и впечатления, но и увлечения искусствами, пробудившаяся страсть к собирательству, а также первая собственная коллекция, разместившаяся в Санкт-Петербурге. В описании этой коллекции встречались имена таких прославленных художников, как Рембрант и Веласкес, хорошие копии с полотен Тициана и Доменикино. В коллекции князя встречались несколько копий с картин Корреджо.
В эти же годы князь познакомился в Италии с молодым немецким пейзажистом Якобом Филиппом Хаккертом и заказал ему итальянские пейзажи. Это знакомство в дальнейшем переросло в долгую дружбу между известным коллекционером и знаменитым художником, ставшим его советчиком и экспертом.
Второе путешествие Н.Б. Юсупова в Европу в 1782 г., в качестве сопровождающего великого князя Павла Петровича и его супруги, также имело огромное значение для формирования коллекции князя. С дружеской помощью Хаккерта Николай Борисович познакомился с Иоганном Фридрихом фон Рейфенштейном, человеком влиятельным в художественных кругах, представлявшим интересы русского двора в приобретении произведений искусства для императорского собрания.
В 1790-е гг. произошел стремительный взлет карьеры Н.Б. Юсупова в России. С 1791 по 1792 г. он был назначен директором Императорских стекольного и фарфорового заводов, шпалерной мануфактуры в Петербурге. В это же время он возглавлял и Мануфактур-коллегию.
Н.Б. Юсупова можно было бы назвать «министром искусств и художественной промышленности».
Интерес князя распространялся и на произведения прикладного искусства, предметы обстановки из драгоценных и полудрагоценных металлов и камней, выполненных иностранными и русскими мастерами конца XVIII — начала XIX в.