С 1387 г. Польша прочно владела территорией Галичины, на которую претендовала и Венгрия. В первый период польские власти старались не нарушать традиции, сложившиеся на этих землях в древнерусский период. Официальные документы составлялись на старорусском языке, а в судебных органах придерживались норм «русского права». Но с 30-х гг. XV в. в Галичине, Холмщине и Западном Подолье в суде стали вводиться нормы польского права, документация велась исключительно на латинском языке, а с XVI в. — еще и на польском. На протяжении 1433—1434 гг. Львовская, Перемышльская и Галицкая земли были объединены в Русское воеводство, в которое позднее была включена и Холмская земля. Западное Подолье с центром в Каменце было преобразована в Подольское воеводство. В 1462 г. отдельным воеводством стало бывшее Белзское княжество.
В первой половине XVI в. для Польши сложилась выгодная торговая конъюнктура в связи с повышением в Европе спроса на сельскохозяйственное сырье (главным образом, на хлеб). В Польше происходил экономический подъем. Землевладельцы стремились приобрести новые земли для дальнейшего увеличения прибыли, и им не давали покоя обширные плодородные украинские земли. Возможность их заполучить открывалась при заключении реальной унии с Великим Княжеством Литовским. Определенные слои населения и в самой Украине были заинтересованы в унии: с середины XVI в. в международную торговлю все активнее втягивалась Волынь, волынские феодалы приобщались к балтийской торговле. Население Волыни и Подляшья надеялось, что полная уния положит конец постоянным приграничным конфликтам. Средние слои шляхты Великого Княжества Литовского с завистью смотрели на привилегии шляхты в Польше. Так, если шляхта Княжества должна была платить подати на содержание войска и отбывать военную службу в общешляхетском ополчении («посполитом рушении»), то в Польше преобладало наемное («квартяное») войско, содержание которого оплачивал король за счет четверти («кварты») доходов от королевских имений. Между тем реальной властью в Великом Княжестве Литовском обладал узкий круг магнатов, которых не устраивало распространение польских порядков на территорию их государства. Большинство из них имело княжеское достоинство, а польское законодательство, начиная с Кошицкого привилея 1374 г., запрещало раздавать лицам княжеского происхождения города и замки как в собственность, так и во временное владение. Литовско-украинско-белорусские магнаты могли лишиться и других привилегий, обеспечивавших им доминирующее положение.
В первой половине XVI в. вопрос об унии между Короной и Великим Княжеством Литовским становился особенно острым. Усилилась борьба сторонников и противников государственной унии. Укреплению позиций сторонников унии способствовали серьезные неудачи Княжества в Ливонской войне (1558—1583). В 60-х гг. XVI в. прошло несколько совместных польско-литовских сеймов, обсуждавших конкретные условия объединения. В 1569 г. на сейме в Люблине магнаты Великого Княжества Литовского в очередной раз высказали свою незаинтересованность в унии и покинули его. Однако литовско-русская шляхта не поддержала их.
Воспользовавшись ситуацией, король и великий князь Сигизмунд II Август в марте 1569 г. издал универсал о присоединении к Польше Подляшья и Волыни, а в мае — Киевщины и Брацлавщины. Шляхта этих земель была уравнена в правах с польской шляхтой. Поэтому в сеймовых дебатах шляхта Волыни поддержала включение в состав Польши не только своей территории, но и Киевщины, с которой Волынь была тесно связана. Украинские магнаты вынуждены были капитулировать и вернуться на сейм. Вскоре киевский воевода князь Василий-Константин Острожский, волынский воевода князь Александр Чарторыйский, винницкий староста Богуш Корецкий присягнули на верность Короне, оговорив в специальном документе сохранение своих прав, земельных владений и защиту православной церкви.
В Люблине 1 июля 1569 г. была подписана уния, согласно которой Королевство Польское и Великое Княжество Литовское объединялись в одно государство — Речь Посполитую (буквально в переводе с латинского — «республика») с выборным королем, общим сеймом, казной и деньгами, единой внешней политикой. Польская и литовская шляхта получила возможность владеть землями в любой части государства. Великое Княжество Литовское все же сохраняло автономию в области местного управления, организации войска и судопроизводства. Но все украинские земли, за исключением небольшой территории Берестейщины и Пинщины (пограничной с белорусскими землями), уже не входили в границы Княжества. Украинские земли, оказавшиеся в составе Короны, образовали Русское (с центром во Львове), Волынское (с центром в Луцке), Подольское (с центром в Каменец-Подольском), Брацлавское и Киевское воеводства. Кроме того, часть украинских земель входила в состав Белзского воеводства.