В этот момент в тунисские дела вмешался Карл V. Он направил к берегам Туниса большой флот (400 судов, в их числе 90 боевых галер) и тридцатитысячную армию. В июле 1535 г. войска Карла V выиграли сражение у турок, которыми командовал Хайреддин Барбаросса. 21 июля испанцы заняли Тунис. Они безжалостно разграбили город, разорили мечети, школы и библиотеки. Захватчики устроили подлинную бойню, не щадили даже женщин и детей. В эти дни погибла треть населения города. Десятки тысяч людей были увезены в рабство. После захвата столицы испанцы заняли весь северо-восток Туниса, в том числе г. Бизерту. В августе 1535 г. армада Карла V покинула Тунис, но в ряде приморских городов остались испанские гарнизоны.
В дальнейшем борьба Испании и Османской империи длительное время была связана с противоборством различных группировок тунисской знати, искавших покровительства у турок или у испанцев. Почти три десятилетия были заполнены вооруженными столкновениями, в которых не раз участвовали испанские и турецкие войска. Только после разгрома мальтийских рыцарей и взятия турками Триполи в Ливии (август 1551 г.), когда под власть султана перешла почти вся Триполитания, возникла возможность восстановления османского господства в Тунисе. На пути к новому овладению Тунисом было немало значительных событий, в их числе четырехмесячная осада мальтийских крепостей турецкими войсками в 1565 г., которая стоила туркам 20 тыс. убитыми, но не принесла им победы. Туркам пришлось эвакуироваться с Мальты, когда на помощь мальтийским рыцарям подошла большая испанская эскадра.
В 1570 г. султан Селим II, наследовавший в 1566 г. Сулейману I, снарядил морскую экспедицию для завоевания острова Кипр, принадлежавшего венецианцам. Началась война с Венецией, ареной которой стали захваченные венецианцами острова в Эгейском и Ионическом морях и земли Венеции на восточном побережье Адриатики. Венецианцев в борьбе против агрессии османов поддержали король Испании Филипп II и папа римский. По инициативе папы была образована «Священная лига», в которой объединились для войны с Османской империей Венеция, Испания, Мальта, Генуя, Савойя и ряд других государств Италии. Военные действия шли с переменным успехом три года, но эта война ознаменовалась чувствительнейшим поражением турок на море.
7 октября 1571 г. у входа в залив Патраикос, у города Лепанто (Греция), произошло морское сражение, одно из самых известных в мировой истории. Во всяком случае, то был последний крупный бой гребных флотов. Объединенный флот «Священной лиги», состоявший в основном из кораблей Испании и Венеции, вступил в сражение с турецкой эскадрой. Турки располагали 230 галерами, а флот католических государств насчитывал 208 кораблей. Бой был упорным, потери с обеих сторон были очень велики. Один из очевидцев событий писал впоследствии: «Море на месте сражения вдруг показалось бойцам красным от человеческой крови». В этом бою потерял левую руку будущий знаменитый испанский писатель Мигель Сервантес, находившийся на одном из кораблей союзников. Турецкая эскадра была разгромлена наголову. Турки потеряли 200 кораблей и 30 тыс. убитыми и ранеными, союзники – 10 галер и немногим более 7 тыс. воинов.
Поражение турок произвело на Европу ошеломляющее впечатление. В Италии и Испании служили благодарственные молебны.
Впрочем, битва при Лепанто не сыграла решающей роли в войне Османской империи со «Священной лигой»: восстановив в короткий срок боеспособность своего флота, турки все же выиграли эту войну. По мирному договору между Венецией и Османской империей (март 1573 г.) венецианцы вынуждены были отдать туркам Кипр и уплатить большую контрибуцию. Однако победа в битве при Лепан-то имела огромное морально-политическое значение для дальнейшей борьбы европейских держав с турецкой экспансией. В Европе стал развеиваться миф о непобедимости турок, их военном превосходстве. Сервантес писал, что в сражении при Лепанто «рассеялось заблуждение, в коем пребывали весь мир и все народы, полагавшие, что турки на море непобедимы». Битва при Лепанто показала впервые всей Европе, что наступательная мощь Османской империи начинает иссякать.
После окончания войны со «Священной лигой» султан Селим 11 вновь начал военные операции в Тунисе. В начале лета 1574 г. он направил туда сорокатысячное войско. Экспедиционная эскадра турок состояла более чем из 300 судов, в том числе 230 боевых галер.
12 июля турецкие войска после упорного боя, длившегося весь день, ворвались в город Тунис. Затем была взята крепость Ла-Гуетте, где стоял семитысячный испанский гарнизон, а также крепость Аль-Бастиун (август – сентябрь 1574 г.).
Почти все защитники погибли в боях, пленные были казнены. Захват этих крепостей и покорение Туниса турками привели к полной утрате испанцами своих владений на севере Африки. Испанский король Филипп II был вынужден пойти на перемирие с султаном (1581).