Полный медицинский справочник фельдшера

Унифицированная методика подсчета лейкоцитов в счетной камере

Принцип

Подсчет лейкоцитов под микроскопом в определенном числе квадратов счетной камеры и расчет их количества в 1 л крови с учетом разведения крови и объема счетной камеры.

Реактив

3-5%-ный раствор уксусной кислоты, подкрашенный для окраски ядер лейкоцитов несколькими каплями раствора метиленового синего. Раствор имеет голубой цвет, может длительно храниться.

Ход определения

В сухую пробирку наливают 0,4 мл реактива 1. Из пальца набирают 0,02 мл крови (можно использовать стабилизированную антикоагулянтом венозную кровь). Вытирают кончик пипетки, затем выдувают из нее кровь на дно пробирки, перемешивают, повторно набирая и выдувая смесь крови и реактива (пипетируя), маркируют пробирку и оставляют ее до момента счета. Хранить смесь крови с раствором уксусной кислоты рекомендуется не более 2–4 ч.

Кровь, разведенную в пробирке уксусной кислотой, тщательно перемешивают и заполняют ею счетную камеру. Заполненную камеру оставляют в горизонтальном положении на 1 мин для оседания лейкоцитов. Не меняя горизонтального положения камеры, помещают ее на столик микроскопа и при малом увеличении (окуляр 10х, объектив 8х) подсчитывают лейкоциты в 100 больших квадратах. Лейкоциты считают по всей сетке в больших квадратах, не разделенных на малые квадраты и полосы, начиная с верхнего левого угла сетки. Для лучшего контрастирования затемняют поле зрения, опуская конденсор и закрывая диафрагму. Считают клетки, расположенные внутри квадрата и лежащие на любых двух линиях, чтобы дважды не подсчитывать одну и ту же клетку.

Расчет числа лейкоцитов проводят исходя из разведения крови (20), числа сосчитанных квадратов (100) и объема одного большого квадрата 1/250, так как сторона квадрата 1/5 мм, высота 1/10 мм:

X = (а х 250 х 20) / 100,

где Х – число лейкоцитов в 1 мкл крови;

а – число лейкоцитов в 100 больших квадратах;

20 – разведение крови;

100 – число больших квадратов;

250 – коэффициент пересчета на 1 мкл, так как объем одного большого квадрата равен 1/250 мкл.

Практически для расчета количества лейкоцитов в 1 мкл крови их число в 100 больших квадратах умножают на 50, а в 1 л – полученную величину умножают на 106.

X = a x 50,

где Х – число лейкоцитов в 1 мкл крови;

а – число лейкоцитов в 100 больших квадратах.

Примечание. При подсчете лейкоцитов неизбежна ошибка в 6–8 % случаев.

Причины ошибок

При большом количестве нормоцитов в периферической крови их засчитывают в число лейкоцитов (и лейкоциты, и нормоциты – ядросодержащие клетки). Для того чтобы правильно установить количество лейкоцитов, надо из общего числа ядросодержащих клеток крови вычесть количество нормоцитов.

Остальные причины ошибок аналогичны тем, которые возникают при подсчете в счетной камере количества эритроцитов.