Вторая половина XIV века представляет в истории нашего Отечества особую эпоху. Это было время невиданного религиозного и культурного подъема Руси, и началось оно с преображения духовного мира человека. Одним из важнейших проявлений духовных перемен второй половины XIV столетия явилось выдающееся событие в истории русской культуры, которое получило название монастырского возрождения. Монастырское возрождение связывается с именами виднейших подвижников: Дионисия Суздальского, Димитрия Прилуцкого, Стефана Махрищского и многих других. Центральное же место в этом славном ряду принадлежит тому, кого называют «игуменом земли Русской» – преподобному Сергию Радонежскому. Истинный светильник веры своим личным примером вдохновлял монашествующих и мирян, сильных мира сего и простых людей.
Серпуховский Высоцкий в честь Зачатия Пресвятой Богородицы мужской монастырь – одна из тех обителей, на которых лежит эпохальная печать второй половины XIV столетия. Его намоленные стены хранят дух и преподобного Сергия, и русского торжества на Куликовом поле. Монастырь был основан в 1374 году устроением серпуховского князя Владимира Андреевича Храброго, двоюродного брата и сподвижника великого князя Дмитрия Донского. Князь Владимир избрал для обители возвышенность к югу от Серпухова на левом берегу Нары, недалеко от ее впадения в Оку, и обратился за благословением к самому преподобному Сергию Радонежскому, духовный авторитет которого в то время уже был чрезвычайно велик. Место, избранное под новую обитель, называлось Высоким, поэтому и сам монастырь получил название Высоцкого. Руководство обителью Радонежский чудотворец поручил одному из своих любимых учеников – Афанасию Старшему.
Осенью 1382 года Дмитрий Донской после нашествия хана Тохтамыша изгнал из Москвы митрополита Киприана. Вместе с ним пределы Руси покинул и преподобный Афанасий. Это одна из самых загадочных страниц в жизни святого. Обстоятельства его ухода из монастыря неизвестны. Возможно, опала великого князя распространялась и на тех, с кем был близок митрополит. Но не исключено, что святой своим поступком выражал несогласие с вмешательством светской власти в жизнь Церкви и ее иерархов. Еще один вариант: преподобный Афанасий давно мечтал избавиться от неизбежных хлопот, связанных с положением настоятеля, и обрести уединение, а отъезд Киприана использовал как повод к исполнению своего тайного желания. На чужбине Афанасий Старший осел в Константинополе, сердце Византии. В каком-то из столичных монастырей он приобрел себе келью, где продолжил подвижническую жизнь. Рогожская летопись отмечает, что преподобный «поживе в молчании с святыми старцы». Местные предания об Афанасии, нашедшие отражение в его Житии, составленном Карионом Истоминым в 1697 году, содержали легенду о том, что он был поставлен в Патриархи Константинопольские. Согласно Житию, произошло это после случившегося знамения от Бога, что только он, и никто другой, может быть Патриархом. В далекой Византии Афанасий Старший не забывал о Высоцком монастыре. По его заказу греческие мастера написали для обители иконы, которые вместе с благословенной грамотой были присланы в монастырь на Высоком еще при жизни преподобного Афанасия Высоцкого Младшего (до 12 сентября 1395 г.). Семь икон «Высоцкого чина» – «Спас», «Богоматерь», «Архангел Михаил», «Архангел Гавриил», «Иоанн Предтеча», «Апостол Петр» и «Апостол Павел» – написаны византийским мастером незаурядного таланта. Этим иконам суждено было оставить глубокий след в русской культуре. Считается, что эти византийские иконы внимательно изучал Андрей Рублев, создавший под их воздействием свой «Звенигородский чин». Ныне они находятся в Третьяковской галерее и в Русском музее.
Афанасия I сменил Афанасий II (Афанасий Младший), при котором обитель окончательно окрепла и расцвела. Второй настоятель Высоцкого монастыря Афанасий Младший скончался в 1395 году. Над его гробницей у западной стены собора была сооружена каменная часовня. Позднее, в 1694 году, на месте могилы преподобного Афанасия была построена маленькая, богато украшенная церковь во имя святого Афанасия Афонского. В 1878 году ее разобрали и на этом месте построили огромный храм во имя святых Афанасия и Сергия, посвященный 500-летию монастыря. В нем покоились мощи местночтимого святого преподобного Афанасия Высоцкого. Этот храм, не самый удачный по своим архитектурным достоинствам, был разобран в 1967 году во время реставрационных работ.
В Высоцком монастыре свято чтили память Сергия Радонежского. Здесь долгое время сохранялись ризы святого Сергия.
Высоцкий монастырь неоднократно подвергался татарским набегам и разорениям. Наиболее сильный ущерб монастырю нанесло нашествие крымского хана Девлет-Гирея в 1571 году, после которого пришлось перестраивать собор и трапезную. Поддержку обители оказывали Иоанн Грозный и Борис Годунов, сделавшие щедрые вклады в монастырь. На эти средства был практически полностью перестроен Зачатьевский собор, который приобрел в эти годы характерные черты «годуновской» архитектуры конца XVI века.