Ваниль

В наши дни анализ ВЭЖХ является рутинно применяемым инструментальным методом для анализа вкусовых соединений в ванильных продуктах или их экстрактах. Анализ ВЭЖХ используется для идентификации и количественного определения соответствующих соединений, а также для дальнейшей оценки подлинности или фальсификации. Были опубликованы и другие методы, такие как анализ ГХ (Mosandl and Scharrer, 2001), но они не применялись для контроля качества и проверки подлинности. Была исследована проверка подлинности, основанная на энантиоселективном анализе летучей фракции экстрактов ванили (Mosandl and Hener, 2001). Среди прочего, γ-ноналактон является одним из второстепенных хиральных соединений ванили, и его экстрагировали и разделяли на R- и S-энантиомеры. Низкий энантиомерный избыток R-γ-ноналактона в 45–63% был признан незначительно высоким, чтобы предоставить однозначное доказательство фальсификации рацемическим γ-ноналактоном. Методы ВЭЖХ, разработанные для ванили, являются надежными, быстрыми и хорошо подходят для рутинного анализа. Подготовка образцов для анализа ВЭЖХ выполняется путем экстракции, в случае стручков, или просто разбавлением экстрактов. Было исследовано влияние методов подготовки проб на аналитические результаты (Ehlers et al., 1999). Эти результаты показывают, что соотношения типичных ванильных ингредиентов, таких как ванилин, ванильная кислота, пара-гидроксибензальдегид и пара-гидроксибензойная кислота, могут варьироваться в зависимости не только от сырья, но и от используемого метода подготовки образца.

Были разработаны и опубликованы различные методы ВЭЖХ, которые, наконец, были приняты в качестве официальных методов (Taylor, 1993; ISO, 1999) или даже стали частью пищевого законодательства Франции (Arrêté du juin 11, 1987).

Стационарные фазы представляют собой преимущественно материалы с обращенной фазой, в основном материалы RP-18, но также RP-8 и другие, такие как модифицированный алкилгалогеном силикагель (Taylor, 1993).

Способы, применяющие обращенно-фазовое разделение, обычно работают с подвижными фазами метанол/вода в изократическом режиме или, чаще, с градиентным элюированием при кислых значениях pH и, наконец, с использованием УФ- или ДМД-детекции (диодно-матричный детектор). Количественное определение может быть основано на внутренних стандартах, а также на внешней калибровке, поскольку большинство обнаруженных соединений доступны в виде чистых химикатов. Время работы около 20 минут; однако с помощью специальных колонок с выбранными стационарными фазами время анализа можно сократить до менее 5 минут (Tracy et al., 2008).

Типичные параметры для анализа ВЭЖХ экстрактов ванили приведены в таблице 15.1. Выявленные соединения также опубликованы и описаны в других разделах этой книги (см. главу 12). Типичными соединениями, которые обнаруживаются с помощью этих анализов, являются ванилин, ванильная кислота, пара-гидроксибензальдегид и пара-гидроксибензойная кислота. Эти аналиты рассматриваются как импактные соединения и представляют собой типичный профиль (рис. 15.1). Простая проверка подлинности может быть выполнена на основании наличия нетипичных соединений, таких как этилванилин, а также отсутствия одного или нескольких из этих импактных соединений. Другие второстепенные соединения, обнаруживаемые с помощью ВЭЖХ, такие как анисальдегид, могут служить индикаторами, позволяющими отличить V. planifolia от V. tahitiensis (Ehlers et al., 1994; Oberdieck, 1998).

ТАБЛИЦА 15.1. Типичные параметры для анализа ВЭЖХ

Прибор	Agilent 1100
Колонка	Lichrospher 100 RP18 (5 μm) 124 × 4 mm
Объем впрыска	2 мкл
Элюент/градиент	Ацетонитрил/вода соотв. фосфатный буфер
Обнаружение	Диодно-матричный детектор

РИСУНОК 15.1. ВЭЖХ-хроматограмма соединений ванильного экстракта.