Решение о начале вооруженной борьбы против немцев было принято на III конференции ОУН(б) в феврале 1943 года. К тому времени стало ясно, что Германия потерпит поражение. Украинское население к тому времени убедилось, что немцы немногим лучше большевиков. Недовольство вызывали террор, массовое изъятие продуктов для нужд Рейха и вермахта, а также угон молодежи на принудительные работы в Германию. Уклонявшиеся от угона и составили костяк отрядов УПА, наряду с дезертирами из местной украинской полиции и полицейских батальонов. Это дезертирство в конце зимы — начале весны 1943 года приняло на Правобережной Украине массовый характер.
УПА начала боевые действия на Волыни против поляков. Бойцы УПА сражались как против польской Армии Крайовой, так и против польских полицейских, заменивших украинцев в германской вспомогательной полиции. Поскольку на Волыни украинцев было более 70 % населения, а поляков — не более 15 %, то УПА одержала верх в украинско-польской войне на Волыни в 1943–1944 годах, перекинувшейся также на Восточную Галицию. Было убито от 50 до 100 тыс. поляков, в подавляющем большинстве — мирных жителей, и не менее 20 тыс. украинцев, в основном также мирных граждан. Стоит отметить, что среди УПА было немало евреев, особенно врачей. Терпимое отношение к местным евреям объяснялось тем, что среди украинцев Галиции антисемитизм не был распространен и евреи скорее рассматривались как союзники против поляков. Иная ситуация была на Волыни, до 1917 года входившей в состав Российской империи, где антисемитизм был государственной политикой. Там среди украинцев антисемитизм имел более глубокие корни. В 1942 году ОУН-Б отказалась участвовать в депортации и уничтожении евреев, проводимых нацистами, довольно своеобразно это мотивировав: «Невзирая на негативное отношение к евреям как к орудию московско-большевистского империализма, считаем нецелесообразным в настоящий момент международной ситуации принимать участие в антиеврейской акции, чтобы не стать слепым оружием в чужих руках и не уводить внимание масс от главных врагов». Под главными врагами понимались нацисты и советские коммунисты. Отдельные бойцы УПА в период службы у немцев или позднее, уже в рядах повстанцев, могли участвовать в убийствах евреев, но точно такие же эксцессы были и у Армии Крайовой, и у советских партизан, что, однако, не являлось следствием политики украинского, польского или советского командования.
Украинские повстанцы действовали на территории польской Украины, а также Северной Буковины и входившего в состав Венгрии Закарпатья. Они боролись также против советских партизан, которые в этих районах были немногочисленны. С крупными же партизанскими соединениями, приходившими с Восточной Украины, бойцы УПА стремились избегать столкновений. В ноябре 1943 года главкомом УПА стал Роман Шухевич.
Немцы оценивали численность УПА в 80—100 тыс. бойцов. Уцелевшие руководители повстанцев, оказавшиеся в эмиграции, утверждали, что в рядах УПА сражалось одновременно от 200 до 400 тыс. человек. Вероятно, общее число бойцов, в разное время сражавшееся в рядах УПА, составляло от 100 до 200 тыс. человек. В отличие от советских партизан, они не получали никакого снабжения из-за линии фронта. Поэтому сторонники Бандеры могли нападать только на небольшие группы и гарнизоны немецких военнослужащих. Абвер же оценивал численность украинских партизан главным образом по их боевой активности. Начиная с осени 1944 года, после ухода немцев с Украины, руководство украинских националистов ориентировалось на Англию и США и делало ставку на послевоенный вооруженный конфликт между СССР и западными странами. В 1948 году, после начала «холодной войны», руководство ОУН установило контакт с разведслужбами Англии и США. Содействие последних выразилось в том, что ряд активистов бандеровской фракции ОУН и прорвавшихся на Запад бойцов УПА, снабженных радиостанциями, были заброшены с помощью американских самолетов в Западную Украину. Они должны были поставлять информацию о Советской Армии и о социально-политической обстановке на Украине.
В УПА не хватало оружия, и она надеялась получить его с помощью немцев. Когда в 1943 году немцы начали формировать 14-ю пехотную (гренадерскую) дивизию СС «Галиция», вместо необходимых 15 тыс. в дивизию явилось 80 тыс. добровольцев. Немецкое командование заподозрило неладное и отобрало только 13 тыс. добровольцев. 14-ю пехотную дивизию СС «Галиция» («Галичина») тем не менее сформировали. Свой первый бой с Красной Армией дивизия «Галичина» приняла в июле 1944 года под Бродами, где попала в окружение. После этого несколько тысяч солдат и офицеров дезертировали и присоединились к отрядам УПА, а оставшиеся вместе с немецкими войсками прорвались из окружения.