Интернет-журнал "Домашняя лаборатория", 2007 №9

Вот рецепт для приготовления 1 литра агара без стерилизации в скороварке:

• 12 г агара

• 12 г мелко перемолотого солода

• 0.5 г источника азота (следует производить ротацию этого компонента, например: желатин, соевое молоко, сухое молоко и т. п.)

• 5–7 опилочных гранул

• небольшой кусочек витаминного драже группы В (0.1 г, ориентиром может служить появление легкой желтой окраски)

• 1л чистой воды, без каких-либо частиц

1. Прокипятите банку с этой средой (а также чашки петри) в кипящей воде в кастрюле, закрытой массивной крышкой, в течение примерно 45 минут, что позволит агару раствориться и уничтожит все живые организмы в среде (чашки петри можно стерилизовать даже дольше).

2. Выньте банку, дайте ей остыть и добавьте перекись, как в первом рецепте. Перекись убьет все споры, оставшиеся в среде. Я добавляю немного больше перекиси в неавтоклавированные чашки, примерно 8 мл на литр среды. Опыт показывает, что неавтоклавированные чашки в среднем подвергаются заражениям чаще, чем автоклавированные перекисные чашки, но и в этом случае результаты заметно лучше, чем при использовании чашек без перекиси.

Следите за образованием подтеков агаровой среды, которые остаются на внешней стороне чашек петри. Если их не вытирать, они через несколько дней покроются плесенью и затем споры плесени проникнут внутрь чашек и начнут прорастать на внешней кромке агара.

Если вы, как и я, работаете с чашками петри многократного использования, очищайте их тщательным образом от старого агара. Даже самое незначительное количество старого агара, оставшегося в чашке, если оно не контактирует с перекисью в свежем агаре, при последующем использовании чашки может обрасти плесенью и послужить своеобразным трамплином для последующего заражения.

Наполнение чашек охлажденной агаровой смесью дает определенное преимущество, которое заключается в заметно меньшем образовании конденсата на внутренней поверхности верхней чашки, чем при заливке горячей смеси. Совершенно очевидно, что в этом случае вам не придется принимать дополнительных мер по борьбе с конденсатом, таких как стряхивание капель с верхних чашек или подогревание чашек для испарения капель. Через более прозрачные чашки будет легче наблюдать за тем, что в них происходит. Тем не менее, поверхность агара все-таки требует некоторого подсушивания, поэтому я оставляю перед использованием открытые чашки на день при комнатной температуре, слегка прикрыв их пергаментной бумагой для защиты от пыли. Чашки с агаром, которые были обработаны паром, получаются более влажными, чем те, в которых агар был стерилизован в скороварке (т. к. температура обработки была ниже, а время обработки — меньше), поэтому их приходится подсушивать в течение более длительного времени.

Если после заполнения чашек у вас осталось некоторое количество неиспользованного агара, его можно сохранить в стерильном виде в холодильнике. Когда вы решите снова использовать его, вы можете повторно расплавить агар, но в этом случае вам также придется снова добавить в среду перекись, потому что нагрев агара до температуры плавления вызовет разрушение перекиси, добавленной в первый раз.

Приобретение грибных культур

Есть несколько путей приобретения грибного мицелия для дальнейшего выращивания на агаре. Можно прорастить грибные споры в питательной среде. Можно извлечь в асептических условиях ткань из свежего гриба и бережно перенести на агар для дальнейшего роста. Можно также купить грибную культуру у коммерческого поставщика, обычно в форме агара в пробирке или чашке петри.

В связи с тем, что перекисесодержащая питательная среда убивает грибные споры, я пока что не занимался проращиванием спор для получения грибной культуры. Напротив, я предпочитаю приобретать грибной мицелий у поставщиков с проверенной репутацией. Я смотрю на это следующим образом: поставщик уже проделал непростую работу по изоляции грибного штамма с нужными качествами и, покупая грибную культуру, я с достаточной степенью уверенности приобретаю мицелий, имеющий точно такие же качества. Для контраста, если вы пытаетесь вырастить грибной штамм, который был изолирован после проращивания спор или клонирования, и он не плодоносит, вы не будете знать, где сокрыты причины неудачи: в условиях роста или самом штамме (споры подобны семенам: их генетические характеристики могут совпадать с родительскими, а могут и не совпадать). Вы можете потратить массу времени впустую, пытаясь добиться плодоношения от бесполезного штамма. Более того, если вам удастся в заданных условиях изолировать культуру и вы по каким-то причинам потеряете ее, то, если культура не была приобретена у коммерческого поставщика, вы не сможете просто вернуться к поставщику и получить дополнительную «копию» штамма. Вам придется получить новый штамм, отвечающим определенным условиям.