Информация о точной концентрации перекиси наиболее важна, когда вы приготовляете агаровые чашки (см. ниже), так как вам придется работать с концентрациями, которые близки к нижнему порогу эффективности. При изготовлении посевного мицелия вы будете иметь дело с заметно более высокими концентрациями, так что возможностей для вариаций будет больше. Для приготовления основного субстрата я использую меньше перекиси, чем для посевного мицелия, но и в этом случае остается некоторая свобода для подбора концентраций. Я рекомендую производить тест с шариком для каждой новой бутылки с раствором перекиси, который используется для работы с агаром а также проверять перекись, который используется для посевного и основного субстрата, если только вы полностью не уверены в надежности поставщика. Поступая, таким образом, вы будете совершенно уверены, что культура защищена настолько, насколько это ожидается. Не исключено, что вам придется провести исследование местного рынка и выбрать продавца, который предоставляет наиболее надежный продукт. Звучит парадоксально, но может оказаться, что самый дешевый вариант является также и самым лучшим, потому что регулярный оборот продукции на складе поставщика будет там, где перекись дешевле. Если перекись отсутствует в ваших местных магазинах, то есть смысл поискать его на фирмах, занимающихся поставкой химреагентов. Они зачастую предлагают 30 % или 35 % раствор перекиси, который можно затем развести. Магазины, обслуживающие бассейны, также могут предлагать перекись в подобной концентрации. Имейте в виду, однако, что столь концентрированные растворы гораздо более опасны, чем стандартный 3 % раствор. Прочтите все предупреждающие надписи на этикетке бутыли и соответствующе обращайтесь с этим раствором.
Первой стадией выращивания грибов является размножение грибной ткани (мицелия) на агаре в чашках петри и последующий уход за ней. Полученные первичные культуры используются для хранения, размножения и поддержания грибных штаммов в здоровом состоянии путем последовательных пересевов, а также для инокуляции вторичных культур — посевного мицелия.
Подготовка чашек петри.
Существует немало рецептов агаровых сред, которые могут быть использованы для выращивания грибного мицелия на чашках петри. Я испробовал некоторые из них, но в настоящее время использую только один: мальт-дрожжевой агар (солод-дрожевой агар, malt yest agar), известный также как MYA. Этот агар подходит практически для любого вида грибов, которые я пробовал выращивать. Данная среда не настолько питательна, чтобы немедленно подвергнуться заражению, хотя многие штаммы распространяются по чашке петри на MYA за две или три недели. По моему мнению, при использовании перекисных сред нет особой необходимости в более быстром росте мицелия, потому что быстрое зарастание среды заставит вас производить пересевы на новые чашки для того, чтобы сохранить мицелий свежим. Кроме того, после нескольких последовательных переносов мицелия из чашки в чашку могут возникнуть проблемы со старением (сенесценцией) мицелия и поэтому некоторые грибоводы рекомендуют в таких случаях начинать все заново, используя сохраненную эталонную культуру. Согласно такому подходу, чем быстрее мицелий растет, тем раньше его придется поместить на хранение, поэтому я бы предпочел мицелий, который растет относительно медленно.
Я работаю с культурами в чашках петри, которые растут на среде, содержащую перекись. Заражения на перекисных чашках случаются редко и при соблюдении некоторых мер предосторожности вам не придется покупать ламинарный шкаф или строить главбокс для того, чтобы оградиться от контаминантов. Вы можете наполнять чашки на открытом воздухе на кухне. Хранить и заращивать чашки можно где угодно, лишь бы это место было относительно чистым, а условия внешней среды были бы подходящими для роста мицелия. Тем не менее, обратите внимание на рекомендации в конце этого раздела.
Мальт-дрожжевой агар, MYA
Вот рецепт, который я использую для приготовления 1 литра мальт-дрожжевого агара:
• 12 г агара
• 12 г тонко размолотого солода
• 1 г пищевых дрожжей
• 0.5 г муки (у меня идет такая ротация сортов: пшеница, рожь, кукуруза, рис, овес, просо)
• 0.5 г кроличьего корма (или другого гранулированного корма для животных)
• 4–5 г гранулированных опилок (количество гранул может быть увеличено для дереворазрушающих видов грибов, которые хуже растут на агаре)
• 1л воды из-под крана