Интернет-журнал "Домашняя лаборатория", 2007 №9

Если вы приобретаете в магазине готовую смесь для приготовления мальт-дрожжевого агара, то она, скорее всего, уже будет содержать первые три ингредиента: агар, солод и дрожжи. Остальные ингредиенты вы можете добавить самостоятельно. Сверьте по инструкции производителя, сколько смеси рекомендуется добавлять к 1 л воды. Обычно требуется примерно 40 или 50 грамм. В зависимости от количественного соотношения агара и солода, можно сократить количество смеси вдвое от рекомендованного и получить среду, которая лучше подходит для длительного и здорового роста мицелия.

Я приготавливаю агаровую среду для чашек в такой последовательности:

1. Смешиваю все ингредиенты в банке с необходимым количеством воды. Банка должна быть в два раза больше по объему, чем объем полученной среды, чтобы агар не выплескивался при закипании во время приготовления.

2. Корректирую pH среды, добавляя небольшое количество питьевой соды (моя вода является кислотной, но если у вас вода щелочная, то можно добавить немного уксуса. Смотрите также замечания об измерении pH субстрата в главе, посвященной приготовлению основного субстрата).

3. Стерилизую среду в скороварке, агар при этом растворяется. (Я использую воду из-под крана без всяких проблем. Более того, когда я растил мицелий на среде, приготовленной на дистиллированной воде, рост мицелия был заметно более медленным). Свободно накрываю банку крышкой и стерилизую в скороварке под давлением 1 атм. в течение не более 10 минут, предварительно дав агару разойтись в течение 10 минут перед тем как закрыть клапан давления. (Если вы приобрели готовую смесь для MYA-arapa, в инструкции к ней может быть указано значительно большее время стерилизации, например, 45 минут. Не делайте этого! 20 минут — это более, чем достаточно, а при дальнейшей стерилизации будут образовываться вредные для мицелия продукты карамелизации среды). Вместе со средой я стерилизую также и набор чашек петри, поместив их в большую консервную банку из-под томатов, накрытую фольгой (я использую пластиковые чашки петри многократного использования и одного литра агара хватает на то, чтобы наполнить около 30 чашек).

4. По окончании стерилизации я осторожно убираю скороварку с плиты и сбрасываю давление пара. Аккуратно вынимаю банку со средой и ставлю ее на стол остывать на открытом воздухе. Нет никакой необходимости беспокоиться о попадании в банку не стерильного воздуха, если воздух более-менее свободен от пылевых частиц. Контаминанты, попавшие в банку с воздухом, погибнут после добавления в среду перекиси.

5. Когда банка остынет и ее можно комфортно брать руками, я помещаю ее в кастрюлю с горячей водой, потому что при этой температуре агар уже близок к застыванию.

6. Добавляю раствор перекиси с помощью пастеризованной пипетки и быстро перемешиваю среду круговыми движениями банки, изменяя пару раз направление вращения. Я стараюсь избегать образования большого количества пузырьков, которые потом могут остаться на поверхности агара.

7. После добавления перекиси я немедленно перехожу к чашкам петри, которые к этому времени расставлены на чистом столе. Свободно разливаю среду в чашки, накрывая их крышками после заполнения агаром.

8. После того, как агар застынет, я убираю чашки на несколько дней на слегка прикрытый лоток, чтобы подсушить агаровую среду.

Агар, приготовленный без автоклавирования

Если у вас нет скороварки или вы не хотите ее использовать, вы все равно можете приготовить защищенные агаровые чашки путем кипячения или обработки паром агаровой среды. При этом придется несколько изменить рассмотренную выше рецептуру. Вам нужно будет заменить ингредиенты, содержащие перекисеразрушающие ферменты на другие ингредиенты, которые не содержат таких ферментов. В рассмотренных ранее рецептах агар, солод и гранулированные опилки не содержат перекисеразрушающих ферментов, а дрожжи, мука и корм для кроликов — содержат. Для того чтобы использовать агаровую среду, нам обычно приходится обрабатывать ее в скороварке, чтобы уничтожить перекисеразрушающие ферменты в этих ингредиентах. Тем не менее, указанные ингредиенты могут быть заменены на другие. Дрожжи служат источником витаминов, поэтому их можно заменить небольшим количеством свежего витаминного драже группы В. Поскольку витаминные препараты производят искусственным путем, они не содержат ферментов. Молотое зерно и кроличий корм являются источником белка, поэтому эти ингредиенты можно заменить на другие перекисесовместимые протеиновые добавки. В общем случае, только подвергнутые глубокой переработке субстанции не содержат перекисеразрушающих ферментов, например, желатин, соевое молоко, обезжиренное сухое молоко и т. п. Для того, чтобы проверить исследуемую добавку на наличие ферментов, смешайте небольшое ее количество с 3 % раствором перекиси и наблюдайте на появлением пузырьков. Отсутствие пузырьков означает отсутствие ферментов.