Интернет-журнал "Домашняя лаборатория", 2007 №9

Одним из решений этой проблемы является уменьшение площади поверхности агаровой среды, например, использование пробирок (типичные размеры 19х125 мм.). Они относительно легки в обращении и хранении, а уязвимую для контаминантов горловину пробирки, можно прожечь в пламени спиртовки при открытии и закрытии пробкой. Вода при хранении испаряется из пробирки намного медленней, чем из чашки Петри, что позволяет дольше сохранять в среде рабочую концентрацию перекиси. Даже без применения перекиси, уровень заражения пробирок низкий. К тому же, количество среды, используемой в агаровых косяках, меньше, чем в чашках Петри. Таким образом, использование метода посева на «косяках» обойдется вам дешевле.

Примечания: некоторые виды грибов не любят повышенную влажность при посеве на «косяки». (Например, Ильмовый Устричный гриб Н. Ulmarius). Вторая трудность состоит в том, что вы не можете также просто контролировать морфологию гриба, как при посевах на чашках Петри (изменение типичной морфологии гриба может указывать на возможное заражение культуры или выявить другие причины подавления роста мицелия). Также возникает определенная трудность в изоляции части мицелия для пересева на другие субстраты (это зависит от типа мицелиальной ткани, образуемой грибом на агаре).

Заливка косяков.

Как залить ряд косяков:

1. Отмерьте компоненты для агаровой среды в жестяную банку достаточного объема (250 мл. среды хватит, примерно, на 20 косяков). Сожмите край банки для формирования «носика», чтобы упростить процесс разливки.

2. Залейте в банку насчитанное количество воды и прикройте банку кусочком фольги.

3. Поместите банку в скороварку и пропарьте без давления в течение 10 минут. Затем закройте клапан скороварки и варите еще 10 мин. В эту же скороварку можно поместить и пробирки для заливки косяков.

4. Снимите скороварку с огня, и после небольшого охлаждения, сбросьте пар из скороварки (не сбрасывайте давление слишком резко, среда выплеснется из банки). Как только давление снизилось, вынимайте среду для разлива. Можете позволить ей слегка охладится, но не до застывания.

5. Добавьте перекись (1,5 мл. для 250 мл. агаровой среды) пастеризованной пипеткой (то есть погруженной на время в кипящую воду).

6. Залейте агар в пробирки тонкой струей, ни в коем случае не испачкав края пробирки. Держите пробку от пробирки в руке при разливе, прижимая ее мизинцем.

7. Закройте пробирку пробкой и установите пробирку на уклон для формирования косой поверхности и застывания среды.

Для легкого воспроизведения привожу рецепт, используемый мной среды для среды MYA (описан в первом томе).

∙ 10 г. агара.

∙ 12 г. порошка солода.

∙ 0,1 г. дрожжевого порошка.

∙ 0,5 г. зерновой муки (я делаю ротацию между пшеницей, рожью, рисом, овсом и просом).

∙ 0,5 г. корма для животных (кролика или любых других зверей). прессованных из опилок гранулы (для грибов плохо растущих на чистом агаре, количество гранул можно увеличить).

∙ 1 л. воды из под крана (pH воды нужно скорректировать небольшим количеством пищевой соды и уксуса в пределах 6–8)

Работа с культурой на «косяках»

Для прививки культуры и забора мицелия полезно иметь микробиологические петли из жесткой проволоки. Вы можете сделать микробиологическую петлю самостоятельно: сформируйте на конце проволоки маленькую петлю, другой конец проволоки пропустите через тонкую стеклянную трубку (3–3,5 мм в диаметре). Расплавьте на газовой горелке кончики трубки, вплавив (нихромовую или стальную) проволоку. Получится микробиологическая петля с стеклянной ручкой.

Для успешной прививки вы должны перенести на «косяк» микробиологической петлей кусочек агара с мицелием (если перенесенный кусочек мицелия с агаром слишком мал, или если вы захватили петлей часть мицелия без кусочка агара, то возможно мицелий не приживется на «косяке»). Если перенос мицелия не удался в первый раз, вы всегда можете попробовать перенести мицелий еще раз на этот же «косяк», сохранив стерильность среды, перекись в среде вам в этом поможет. При пересадке я захватываю микробиологической петлей минимально необходимый для прививки кусочек агара с мицелием. На первых порах это сделать непросто, но со временем у вас все получится. При манипуляциях с пробиркой, не забывайте прожигать в племени спиртовки горлышко пробирки и пробку.

Очистка мицелия на «косяках».