Отрезают соответствующую часть объекта и кладут ее в химическую пробирку, куда налит раствор едкого кали или натра (кусочек с горошину растворяют в 5-6 см3
воды).Препарат кипятят на спиртовой лампочке, пока не будут разрушены его мягкие части.
Препарат переносят в чистую воду (можно с прибавлением уксусной кислоты) для удаления едкого кали.
После основательной промывки препарат переносят последовательно в 70%, 95% и в абсолютный спирт, просветляют кедровым маслом и заключают в канадский бальзам.
Покрывая объект покровным стеклом, подкладывают под его углы ножки, сделанные из воска или из кусочков спички, чтобы давление покровного стекла не изменило формы объекта.
Если изолируемые части многочисленны и мелки, то их центрифугируют и отсасывают пипеткой со дна пробирки.
Наклейка тотальных препаратов на предметное стекло по способу Е. Н. Павловского
Выпрепарованный орган (например, половой аппарат или мальпигиевы сосуды) на шпателе переносится в каплю физиологического раствора на предметное стекло, где тщательно расправляется иглами и приводится в желательное положение.
Узкой полоской фильтровальной бумаги осторожно отсасывают физиологический раствор и иглой приводят сдвинувшиеся части органов в их прежнее положение.
Наносят на объект капля по капле из пипетки жидкость Карнуа (Рецепт см. ниже), следя за тем, чтобы не сдвинуть части органов.
Покачивают препарат из стороны в сторону, чтобы лучше профиксировать ткани.
Через 1-5 минут (в зависимости от толщины препарата) жидкость Карнуа сливают; взамен её прибавляют 95°/о спирта, которым промывают препарат.
Сливши спирт, наносят на препарат несколько капель 1/4-1/2% раствора фотоксилина, коллоксилина, целлоидина или коллодия; все эти вещества (к ним можно добавить фотографическую плёнку со смытой эмульсией) растворяют в смеси равных частей абсолютного спирта и серного эфира. Препарат покачивают, чтобы коллодий покрыл его сверху.
Излишний раствор коллодия сливают, наклонив стекло; препарат 1/4-1/2 минуты держат на воздухе, чтобы коллодийная пленка чуть загустела (но не высохла).
Препарат кладут в 85% спирт на полчаса или на час, затем перемещают его в 70% спирт, в коем он может храниться неограниченно долгое время до окончательной обработки.
Если наклеивают препарат, бывший в спирту, то начинают прямо с пункта 6.
Окраска и окончательная обработка наклеенных тотальных препаратов
Из 70% спирта препарат, наклеенный на предметное стекло, переносят в воду на 10-60 минут (в зависимости от толщины и проницаемости объекта для воды).
На 5-10-30 минут (установить опытом) препарат погружают в квасцовый кармин (Квасцовый кармин приготовляют прибавлением к 100,0 см3
дистиллированной воды, 2,0 г калийных квасцов и 1,0 г кармина (сорт Nacarat). Кипятить 15 минут, остудить, отфильтровать и положить в раствор несколько кусочков тимола или камфары (против плесени)) или в гемалаун.Препарат переносят последовательно в несколько порций чистой воды и в последней оставляют его на 1-2 часа.
На несколько часов стекло с препаратом погружают в 75% и в 95% спирт.
Обезвоживают препарат в 100% спирту от получаса до двух часов (в зависимости от препарата). При более долгом держании спирт растворит коллодий, и препарат сползёт.
Окраска ненаклеенных тотальных препаратов
Из 70% спирта препарат переносят в 50% спирт, а затем в дистиллированную воду.
Препарат кладут в квасцовый кармин, длительность окраски определяют на опыте (от нескольких минут до нескольких часов).
Промывают в свежих порциях воды несколько часов.
Переносят на шпателе в 50, 75, 85% спирт.
Обезвоживают в 100% спирте и заключают в канадский бальзам, как было указано выше.
При отсутствии абсолютного спирта, из 96% спирта препарат переносят в карболксилол, затем в чистый ксилол и после просветления в канадский бальзам.
Иногда объекты, подлежащие резанию на микротоме, окрашивают сразу целым куском, затем заливают в парафин.
Для этой цели обычно применяется борный кармин (
Из 70% спирта препарат переносят в борный кармин на несколько часов.
Из краски препарат перекладывают в 70% спирт с 1% соляной кислоты. Кислый спирт вытягивает лишнюю краску из протоплазмы (дифференциация окраски); спирт сменяют по мере его окрашивания.
Выдерживают препарат в свежих порциях 75% спирта для удаления кислоты. Далее объект или заключают в канадский бальзам, как уже указано, или заливают в парафин.
Вскрытие мелких членистоногих