Пять литров красного. Что необходимо знать о крови, ее болезнях и лечении

Для определения гемоглобина использовался гемометр Сали, представлявший собой штатив с тремя гнездами. В крайних гнездах находились ампулы со стандартным раствором с известным содержанием гемоглобина. В среднем гнезде находилась градуированная пробирка, куда пипеткой вносились раствор соляной кислоты и кровь, в результате смешивания которых из гемоглобина образуется гемин, придающий раствору бурый цвет. Содержимое пробирки разводили, прибавляя по каплям дистиллированную воду и перемешивая стеклянной палочкой, пока его цвет не сравняется с цветом стандартного раствора боковых ампул гемометра. Ошибка при определении содержания гемоглобина этим методом могла составлять ±30 %.

Для исследований образцов крови под микроскопом использовали пробирки с разными растворами для разведения: для эритроцитов – с физиологическим раствором (0,9 %-ный раствор поваренной соли); для лейкоцитов – с 3–5 %-ным раствором уксусной кислоты, где эритроциты лизировались (растворялись) и можно было без помех подсчитать все виды лейкоцитов; для тромбоцитов – с 1 %-ным раствором оксалата аммония, тоже вызывающим лизис эритроцитов.

Подсчет клеток под микроскопом проводился с использованием счетных камер. Счетную камеру для подсчета клеток в заданном микрообъеме жидкости и представляющую собой толстое предметное стекло с микроскопической сеткой и прямоугольным углублением (камерой) для жидкости предложил в 1874 году французский анатом Луи-Шарль Малассе (1842‒1909). Наблюдая за несколькими квадратами сетки и зная их площадь и глубину камеры, можно подсчитать количество клеток в определенном объеме жидкости, то есть их концентрацию. В отечественной лабораторной практике использовалась (и до сих пор используется) камера с усовершенствованной сеткой, созданная и предложенная к использованию в 1914 году профессором Казанского университета Николаем Константиновичем Горяевым (1875‒1943), в честь которого это устройство так и называется – камера Горяева, хотя правильнее его называть камерой Бюркера с сеткой Горяева.

Устройство представляет собой толстое предметное стекло с плоской площадкой в центре, углубленной на 0,1 мм. На дне площадки нанесены две сетки, разграниченные поперечной канавкой. Сбоку от сеток расположены стеклянные площадки, к которым притирается шлифованное покровное стекло. После притирания покровного стекла образуется камера, закрытая сверху и с двух боковых сторон, а с двух других сторон остаются щели (капиллярные пространства), через которые камеру и заполняют суспензией. Сетка состоит из 225 больших квадратов, из которых 100 – пустые, 25 разделены каждый на 16 малых квадратов и 100 разделены полосами (самостоятельного значения эти полосы, образующиеся при гравировке малых квадратов, не имеют). Эритроциты считали в пяти расположенных по диагонали сетки квадратах, разделенных на малые, то есть в 80 малых квадратах, а в 100 больших квадратах сетки, не разделенных на малые квадраты и полосы, – лейкоциты, поскольку их на три порядка меньше, чем эритроцитов. Исходя из количества подсчитанных клеток, микрообъема каждого квадрата, степени разведения крови по специальным формулам определяли число клеток в единице объема.

Рис. 7. Счетная камера Горяева (а – вид сверху; б – вид сбоку; в – деление камеры на квадраты; h – глубина камеры)

Метод подсчета тромбоцитов в камере Горяева с применением фазово-контрастного микроскопа является хоть и самым точным, но очень трудоемким, так что часто подсчет тромбоцитов вели в окрашенных мазках крови. В них же измеряли и диаметр эритроцитов, хотя мазки крови в основном брались для исследования лейкоцитарной формулы, то есть процентного состава лейкоцитов каждого вида. Для подобной процедуры требуется окраска мазков.

Окрашивание крови