Пригодность к употреблению при холодном хранении определяют с помощью пробных инокуляций. Через определенные промежутки времени из холодильника берут мицелий на зерновом субстрате, встряхивают его и этим мицелием заражают стерильный субстрат в литровых сосудах. Субстрат инкубируют при температуре 22 °C. Через 5–8 дней после заражения производят оценку скорости роста, внешнего вида и запаха мицелия. Результаты опытов показали, что для оценки скорости роста достаточно одного контрольного заражения стерильного субстрата хранившимся мицелием после его основательного встряхивания. Кроме пробных инокуляций, существуют другие простейшие способы определения пригодности мицелия для дальнейшего использования. В холодильнике отличить активный мицелий от неактивного трудно. Обычно зерновой субстрат хорошо пронизан гифами мицелия. Однако если хранившийся мицелий из каждой партии сильно встряхнуть и оставить на 3–4 дня при температуре 20–22 °C, разница будет видна отчетливо. У активного мицелия после встряхивания начинается быстрый рост, а у испорченного, непригодного к употреблению мицелия рост не наблюдается, зерна оголены и имеют бурый оттенок. Вторым признаком непригодности хранившегося мицелия является отчетливо ощутимый через пробку кислый запах брожения, тогда как у здорового мицелия такого запаха не бывает: обычно он пахнет грибами. У свежеприготовленного зернового мицелия pH = 6,4–6,7, а старого с кислым запахом pH ниже 6,0, в некоторых случаях даже ниже 5,0.
На сохранность мицелия влияют такие факторы, как вид зернового субстрата, величина сосудов, количество субстрата и проветривание. Установлено, что на высококлейковинном зерне сохранность мицелия самая плохая. У просяного мицелия сохранность выше, чем у пшеничного. При этом мицелий на стерильном субстрате Тилля может храниться в холодильнике в течение года и дольше при температуре 2–5 °C. Величина сосудов и количество зерен имеют второстепенное значение при условии одинакового соотношения между объемом сосудов и их наполнением. Одним из наиболее важных условий является проветривание мицелия. При недостаточном проветривании мицелий может повреждаться, поскольку при затрудненном обмене воздуха замедляется пронизывание субстрата гифами. Особое значение имеет проветривание сосудов с мицелием с момента взятия их из холодильника до инокуляции субстрата.
В последнее время для предотвращения вегетативного роста мицелия успешно используется жидкий азот. Исследована степень влияния длительности хранения маточной культуры в жидком азоте на продуктивность и качество последующей культуры. Определено действие защитного агента на жизнеспособность мицелия при длительном сроке хранения. Замена защитного агента диметилсульфоксида глицерином в период замораживания оказала более благоприятное влияние на сохранность мицелия. Перед закладкой на хранение мицелий выдерживают при температуре 5 °C в течение 1–7 суток. Затем в 1– или 2-миллиметровые стеклянные ампулы помещают по 6–8 зерен, обросших мицелием, и добавляют 0,5 мл суспензионной среды. Перед замораживанием помещенные в ампулы зерна с мицелием выдерживают при комнатной температуре в течение 1 часа. Замораживание проводится медленно, по технологии, обеспечивающей контроль за процессом охлаждения. Замороженные культуры хранят в рефрижераторе с жидким азотом при температуре —160–196 °C. Для восстановления замороженного мицелия ампулы держат в водяной бане при температуре +38 °C до тех пор, пока не исчезнут последние следы льда. Для этого потребуется немногим более 1 минуты. Рост мицелия всех штаммов грибов определяют до хранения и после него. Для проверки роста одно зерно с мицелием культуры помещали в чашку Петри в агаризованной среде. Жизнеспособность и силу роста оценивали по данным роста в чашках Петри и по результатам урожайности. Для определения урожайности были использованы 36 ампул после хранения их в рефрижераторе с жидким азотом. Содержимое каждой ампулы использовалось для инокуляции одной мицелиальной культуры. Для выгонки мицелия требуется 21 день. Применяемая методика позволила сравнить жизнеспособность и силу роста мицелия до хранения в рефрижераторах с жидким азотом и после него. Установлено, что рост мицелия, хранившегося в таких условиях в течение года, был почти таким же, как и до хранения.
Использование жидкого азота можно считать эффективным способом сохранения культуры гриба, при котором происходят лишь минимальные генетические изменения мицелия. При применении этого способа хранения изменчивость свойств мицелия незначительна, поэтому легко обеспечивается сохранность морфологических и биохимических мутационных форм. Поскольку в настоящее время еще мало изучены природа и пути распространения болезней и отклонений от нормы в развитии мицелия, новый способ хранения в жидком азоте может свести к минимуму проявление указанных факторов.
Компосты для выращивания шампиньонов