15 ноября 1941 г. O-16 и K-XVII (третья субмарина дивизиона - K-XVIII - в это время находилась ремонте) прибыли на рейд Сурабайи, где на них начали грузить запасы по штатам военного времени. 21 ноября был получен приказ о готовности к переходу в Сингапур, который должен был состояться до 9 декабря. 27 ноября американцы объявили так называемое «Военное предупреждение», доведя информацию об этом до союзников. Командующий голландским флотом в Ост-Индиях адмирал Хелфрих получил эту информацию во время бала. По прибытии в штаб он отдал приказ о повышении боевой готовности. 30 ноября две голландские подводные лодки вышли в море. 1 декабря союзная разведка получила информацию о том, что японцы высадят десант в районе перешейка Кра (Королевство Таиланд). Командующий британской военно- морской станцией в Китае адмирал Лейтон рассчитывал, что союзные подводные лодки займут позиции в Сиамском заливе, но у Хельфриха было особое мнение, весьма отличающееся от мнения британского коллеги. Он отдал приказ подводным лодкам выйти на позицию в 50 милях от Куантана (восточное побережье Малайи), то есть в 300 милях от Сиамского залива. К исходу суток O-16 и K-XVII заняли назначенные им позиции, где и патрулировали до 7 декабря.
Дивизион
1-й ДИВИЗИОН ПОДВОДНЫХ ЛОДОК
2-й ДИВИЗИОН ПОДВОДНЫХ ЛОДОК
3-й ДИВИЗИОН ПОДВОДНЫХ ЛОДОК
4-й ДИВИЗИОН ПОДВОДНЫХ ЛОДОК.
Командир
капитан 3 ранга А.Я. Буссемакер капитан 3 ранга М.А.Я. Дерксема капитан 3 ранга П.А. Мулок ван дер Флиес Вик капитан 3 ранга Ф.Я.А. Кнопс
Субмарины
O-16, K-XVII, K-XVIII K-VIII, K-IX, К-Х, K-XI, K-XII, K-XIII K-XIV, K-XV, K-XVI O-19 и O-20
8 декабря радисты O-16 приняли радиограмму, в которой говорилось о японском нападении на Перл-Харбор, а затем - о вступлении Голландии в войну. Экипаж перешел на несение службы в режиме военного времени. В первый день войны контакта с противником не было. В ночь с 8 на 9 декабря голландская подводная лодка уклонилась от двух японских эскадренных миноносцев.
9 декабря, около 22 часов по яванскому времени, была получена радиограмма, зашифрованная заранее разработанным шифром и переданная на английском языке. Она предписывала всем голландским подводным лодкам, находившимся в подчинении британского командования, занять позиции в районе возможного появления вражеского десантного соединения.
Позиция O-16 была назначена в 40 милях от маяка Пулу-Оби (мыс Камбоджа) по пеленгу 180”. Там ночью 10 декабря в сильный дождь и в плохую видимость O-16 вышла в атаку на японский конвой. Был произведен трехторпедный залп, поразивший транспорты «Аятосан Мару» (9788 брт) и «Сакура Мару» (7170 брт), но, к сожалению для голландских подводников, они остались на плаву.
Следующая атака была произведена в ночь на 12 декабря. Сигнальщики субмарины заметили огонь, принадлежавший японскому транспорту, который зашел в бухту Петани. Буссемакер принял решение зайти в бухту, где было обнаружено скопление вражеских транспортов и охраняющих их военных кораблей.
По свидетельству боцмана К. де Вольфа атака была выполнена следующим образом: «В бухте стояли четыре японских транспорта, располагались они полукругом. Сначала был выполнен залп из носовых торпедных аппаратов, затем после разворота - из кормовых. Все шесть торпед нашли дорогу к дому. Попадания!!! К несчастью, вражеские торговые суда не затонули, так как бухта была слишком мелководной, глубиной 8-10 метров. Большой проблемой было выбраться из бухты. Командир принял решение не идти сразу к выходу из бухты, а какое-то время остаться у берега. Тем временем японские эскадренные миноносцы искали нас в море. Нам удалось выбраться из бухты, и мы взяли курс на Сингапур».[* Цит. по: Stach В. Bez szans па swyicestwo I I «Okrety Wojenne», №117, s.50. ]
Жертвами этой торпедной атаки стали транспорты «Асосан Мару» (8811 брт), «Тосан Мару» (8666 брт) и «Кинка Мару» (9305 брт). Все они были позднее подняты и приняли участие в военных действиях, однако ни одна из жертв O-16, поврежденных во время атак 10 и 12 декабря, не дожила до сентября 1945 года!