Вид-Инвентарный номер | Опыт 1 | Опыт 2 | |||
---|---|---|---|---|---|
8 месяцев ПИ | 3 месяца ПИ | 8 месяцев ПИ | 20 месяцев ПИ | 34 месяца ПИ | |
4.40 ± 0.52 | 8.51 ± 0,82 | 6.26 ± 0.36 | 6.61 ± 0.98 | 3.28 ± 0.12 | |
4.35 ± 0.49 | Н.о. | Н.о. | Н.о. | Н.о. | |
6.53 ± 0.04 | 8.17 ± 0.46 | 8.13 ± 0.64 | 10.4 ± 0.23 | 8.95 ± 0.46 | |
Н.о. | 8.58 ± 0.12 | 8.31 ± 0.32 | 9.82 ± 0.70 | 7.90 ± 0.54 | |
Н.о. | 8.67 ± 0.14 | 8.43 ± 0.04 | 10.3 ± 0.31 | Н.о. | |
6.55 ± 0.08 | Н.о. | Н.о. | Н.о. | Н.о. | |
6.37 ± 0.15 | Н.о. | Н.о. | Н.о. | Н.о. |
Н.о. – не определен.
CymMV нельзя надежно обнаружить в ванили на основании симптомов, и поэтому диагноз должен основываться на обнаружении вируса. Для обнаружения CymMV были описаны многочисленные инновационные молекулярные методы, такие как: ДНК-биосенсоры на основе кварцевых микровесов (Eun et al., 2002), иммуно-капиллярный зональный электрофорез (Eun and Wong, 1999), DIG-меченные зонды кРНК, (Hu and Wong, 1998), антисыворотка к рекомбинантным капсидным белкам (Lee and Chang, 2008), суперпарамагнитные шарики (Ooi et al., 2006), TD/RT-PCR (Seoh et al., 1998), бумага для быстрого иммунофильтрацинного анализа (Tanaka et al., 1997) и анализы магнитовосстановления с использованием антител без промывки (Yang et al., 2008).
Поскольку частицы CymMV обладают высокой иммуногенностью (Francki, 1970) и обильно и равномерно распределены в тканях хозяина (Lawson and Hearon, 1974; Leclercq-Le Quillec and Servé, 2001), серологические методы, такие как ELISA или DIBA, дешевые и надежные, хорошо подходят для рутинной диагностики вируса. Как и следовало ожидать, исходя из низкой аминокислотной дивергенции CP, моноклональные, а также поликлональные антитела выявляли широкий спектр изолятов (Lee and Chang, 2008; Vejaratpimol et al., 1998; Wisler et al., 1982). Однако, Рид (Read et al., 2007) сообщил о штамме (Thailand 306), который не реагировал с коммерческим моноклональным антителом. Этот штамм характеризовался аспарагиновой кислотой вместо аспарагина в позиции 123 CP, уникальной для этого изолята.
Более специфичное и чувствительное обнаружение вируса может быть достигнуто с использованием методов, основанных на нуклеиновых кислотах, и был разработан ряд пар праймеров и различных форматов для обнаружения CymMV с помощью ОТ-ПЦР (Barry et al., 1996; Bhat et al., 2006; Lim et al., 1993b; Martos, 2005; Ryu et al., 1995; Seoh et al., 1998; Yamane et al., 2008).
Эпидемиология
Заболеваемость CymMV на ванильных участках оценивалась в нескольких исследованиях, проведенных в различных агрономических условиях, Выявились очень разные ситуации, необъяснимые только систематической ошибкой выборки. На Коморских островах, например, весь посадочный материал кажется здоровым, поскольку недавнее расширенное обследование не обнаружило ни одной зараженной вирусом лианы (Grisoni and Abdoul-Karime, 2007). На Мадагаскаре ситуация была аналогичной в начале 2000-х годов, когда подавляющее большинство традиционных фермерских плантаций были свободны от CymMV. Однако, большая часть черенков новых сортов, размноженных в хранилище гермоплазмы в Амбохитсара (район Анталаха), были инфицированы (Grisoni et al., 1997; Leclercq-Le Quillec and Nany, 1999, 2000). На островах Реюньон и Общества относительно высокая заболеваемость CymMV была зарегистрирована после того, как в 1990-х годах были начаты интенсивные программы культивирования (Benezet et al., 2000; Grisoni et al., 2004; Leclercq Le Quillec et al., 2001), и эпидемиологический анализ мог проследить этот путь распространение вируса на ванильных участках.
Благодаря высокой стабильности вириона и его повышенной концентрации в тканях хозяина, CymMV легко передается механическим путём (Jensen and Gold, 1955). Поэтому он может эффективно распространяться на участках или в теплицах в отсутствие конкретных переносчиков, исключительно в результате попадания вируса из инфицированного сока через микротравмы в эпидермальные клетки. Это было специально продемонстрировано для ванили в теневых домах на острове Реюньон (Leclercq Le Quillec et al., 2001) и ФП (Grisoni et al., 2004). Мониторинг CymMV в этих теневых домах показал быстрое распространение в больших скоплениях, в основном вдоль рядов. Эти результаты подтверждают предположение, что CymMV заносится в теневые дома через инфицированные черенки, собранные на участке, а затем распространяется с растения на растение в основном в результате процессов возделывания (искусственное опыление, петлеобразование) и, возможно, корневым анастомозом между соседними лианами.