Можно утверждать и то, что Иосиф Волоцкий был одним из первых русских меценатов, покровителем искусств и ремесел. Иосиф Волоцкий для росписи каменного Успенского собора, возведенного в 1486 г., пригласил известного московского иконописца – художника Дионисия. В собрании Иосифа Волоцкого находились 87 произведений Дионисия и иконы кисти знаменитого Андрея Рублева. Благодаря Иосифу Волоцкому монастырь был одним из крупнейших хранилищ древней иконописи, шитья, рукописей. Иосиф Волоцкий был тонким ценителем церковного искусства, и к нему тянулись близкие ему по духу люди. С 1484 г. и до начала XVI в. в монастыре неоднократно работал Дионисий; любовь к прекрасному искусству Дионисия Иосиф Волоцкий пронес через всю свою жизнь. Человек огромных знаний, культуры, большой знаток и тонкий ценитель церковного искусства, Иосиф Волоцкий стремился иметь в своем монастыре иконы, написанные Андреем Рублевым. Так некоторые иконы, написанные рукой А. Рублева, оказались в Иосифо-Волоцком монастыре.
Особую значимость имеет письменное наследие Иосифа Волоцкого. С царями, князьями и княжнами Иосиф Волоцкий вел переписку, в письмах призывал и поучал их к помощи нуждающимся и другим формам проявления милосердия, учил добру. Его обширное письменное наследие интересно и актуально и в наши дни.
Великий русский историк В.О. Ключевский (1841–1911) писал: «Ни один русский монастырь не обнаружил литературного возбуждения, равного тому, какое находим в обители Иосифа». Библиотека монастыря играла важную роль не только в его жизни, сюда для чтения книг и рукописей ехали издалека. В ХVI в. в монастырской книжнице было около 1150 ценных старых рукописей.
Именно Иосиф Волоцкий и созданный им монастырь стали деятельными защитниками православия от ереси. Редчайшая эрудиция, великая образованность, яркий полемический талант Иосифа Волоцкого сделали его главным борцом с ересью. Он написал 16 обличительных «Слов», известных под общим названием «Просветитель». Именно они сыграли выдающуюся роль в искоренении ереси «жидовствующих». Специально для иконописца Дионисия Иосиф Волоцкий написал «Послание иконописцу» – обширный трактат против «жидовствующих». Иосиф Волоцкий, а также Новгородский архиепископ Геннадий возглавили и, в конце концов, искоренили в стране ересь «жидовствующих».
Иосиф Волоцкий умер в 1515 г., когда ему было 75 лет. Он причислен к лику святых в 1578 г.
Иосифо-Волоцкий монастырь за всю историю церковного служения всегда верно и строго выполнял заветы своего основателя, был активным борцом за права и силу православия во имя создания и сохранения сильного Русского государства, развитию которого в разное время мешали и мешают всякого рода ереси. Духовная сила Иосифо-Волоцкого монастыря сделала его своего рода «кузницей кадров» для управления Русской православной церковью. Так, преемник Иосифа Волоцкого, Даниил Рязанцев, которого он сам назначил в игумены, возглавил обитель в 1515–1522 гг., а в 1522–1539 гг. был главой Русской православной церкви. В монастыре иночествовали Гурий и Герман – просветители Казани. Только в ХVI в. из Иосифо-Волоцкого монастыря вышли 17 архипастырей Русской православной церкви.
Иосифо-Волоцкий монастырь был одним из военных форпостов Москвы. В начале ХVII в., т. е. в Смутное время, в дни польской интервенции монастырь выдержал польско-шляхетскую осаду, его укрепления сильно пострадали. Монастырь ненадолго захватил сподвижник Лжедмитрия II князь Рожинский, но он был разбит отрядом воеводы Валуева.
Порой монастырю приходилось выполнять карательные функции, в том числе и по отношению к влиятельным особам, многие помещения монастыря использовались как казематы для особо опасных преступников. Так, в Германовской башне Иосифо-Волоцкого монастыря был заточен свергнутый с престола боярский царь Василий Иванович Шуйский (XVI в.). Когда искусный польский гетман Жолкевич уехал в 1610 г. из Москвы (оставив там вместо себя начальником польского войска пана Гонсевского), он увез с собой из монастыря в Польшу бывшего царя Василия Ивановича Шуйского с братьями.
В первой четверти XVI в. монастырь часто служил духовной тюрьмой. Здесь отбывал часть своего заключения ученый монах Максим Грек (Михаил Триволис, 1470–1556). Он нашел большое число ошибок в переводах греческих церковных книг на славянский язык и осудил желание великого князя Московского Василия III развестись из-за отсутствия детей с его женой Соломонией Сабуровой и жениться второй раз на молодой княжне Елене Глинской. Так высокого класса переводчик церковных книг с греческого языка на русский, крупный ученый-богослов и высоконравственный человек оказался в опале, но позже был канонизирован.