Вирусные болезни человека

Наличие вируса в культуре не позволяет дифференцировать первичную или рецидивирующую инфекцию, хотя подтверждает вирусоносительство, что очень важно для верификации диагноза у новорожденных.

Ограничениями для использования вирусологических методов является также потребность в специальном оборудовании для культивирования клеток.

Молекулярно-генетические методы исследования (ПЦР-диагностика). Это высокочувствительные и высокоспецифичные методы исследования, так как с помощью ПЦР можно выявлять как активный, так и латентно присутствующий в материале вирус на уровне чувствительности одного вирусного генома на миллион исследуемых клеток. Модифицированные методики позволяют производить количественное определение вирусной нагрузки.

Как и при вирусологических методах исследования, доказательство наличия ДНК вируса в исследуемой пробе имеет диагностическую ценность только при исследовании крови и СМЖ, когда оно указывает на активный характер процесса.

Иммунохимические (серологические) методы исследования включают в себя выявление вирусных антигенов или специфических антител к ЦМВ.

В настоящее время используются в основном методы иммунофлюоресцентного выявления антигенов ЦМВ в инфицированных культурах клеток или в мононуклеарных клетках периферической крови, которые обрабатывают моноклональными антителами к a– или b-протеинам ЦМВ и иммунофлюоресцентным конъюгатом, а затем исследуют под микроскопом в УФ-лучах.

Иммунофлюоресцентное выявление антигенов позволяет обнаруживать вирусные антигены в слюне, моче, СМЖ, аутопсийном материале. Его специфичность составляет 60 – 70 %, преимущество – относительная быстрота. Однако его применение, помимо потребности в специальном оборудовании, имеет те же ограничения, что и для других методов выявления ЦМВ или его дериватов. Диагностическое значение имеют наличие и динамика в сыворотке (плазме) крови титров специфических антител классов IgM и IgG, что может быть определено при исследовании «парных» сывороток.

Выявление специфических IgM и IgG имеет смысл проводить при диагностике первичного инфицирования или врожденной инфекции. Выявление IgM в крови плода, полученной путем кордоцентеза, указывает на внутриутробное инфицирование. Врожденная инфекция может быть подтверждена либо путем выделения вируса из глоточного мазка в течение первых 3 нед. жизни, либо путем выявления в крови ребенка специфических IgM, которые указывают на недавно развившуюся неонатальную или постнеонатальную инфекцию.

Выявить антитела можно с помощью ИФА, РН, РСК. Однако классические серологические тесты в силу серопозитивности большей части человеческой популяции сложны для интерпретации. Поэтому основным методом анализа на сегодняшний день является ИФА, сочетающий достаточную быстроту выполнения, высокую чувствительность и специфичность с простотой исполнения и относительной дешевизной.

Диагностика ЦМВИ у беременных. Обследование беременных на наличие антител к ЦМВ рекомендовано приказом МЗ от 10.02.2003 г. № 50, но не является обязательным.

Для оценки риска врожденной ЦМВИ серонегативным женщинам с клиническими проявлениями первичной инфекции рекомендуется выполнение ПЦР или повторные исследования через 3 – 4 нед. для подтверждения сероконверсии.

При выявлении IgM или, особенно, при нарастании титра антител в повторном исследовании предполагается инфицирование в пределах последних 16 нед. или реактивация ЦМВИ. Верификация первичной инфекции или рецидива может быть осуществлена при определении авидности антител. Для первичной инфекции характерна низкая авидность, для рецидива – высокая. Также может быть использовано исследование сыворотки крови на антитела к антигенам ранних стадий репликации ВПГ (так называемые предранние белки) и ПЦР в реальном времени (количественная).

Диагностика ЦМВИ у плода выполняется с использованием неинвазивных и инвазивных методов диагностики.

Неинвазивные методы основаны на использовании неспецифических критериев внутриутробной ЦМВИ. К ним относятся:

1) клинико-анамнестические критерии:

а) акушерская патология при предыдущей и настоящей беременности (преждевременные роды, выкидыши, угроза прерывания беременности, многоводие, гестоз, фетоплацентарная недостаточность);

б) экстрагенитальная патология (субфебрилитет, лимфаденопатия, ОРЗ– или мононуклеозоподобный синдром, гепатоспленомегалия и др.);

2) клинико-лабораторные критерии:

– УЗИ-признаки задержки развития плода, «неиммунный отек» и др.;

– увеличение содержания в крови a-фетопротеина, хорионического гонадотропина, белка беременности PAPP-A, активности плацентарной щелочной фосфатазы;

– повышение цитотоксической активности натуральных киллеров;